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Procédés d'évaluation

Eppendorf BioSpectrometer

basic

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12 Procédés d'évaluation

Ce chapitre est consacré aux procédés d'évaluation proposés dans les programmes de méthodes ainsi

qu'au calcul d'une dilution, qui sera effectuée par le logiciel de l'appareil.

12.1 Valeurs d'absorbance

Les valeurs de l'absorbance sont représentées comme A

XXX

(XXX étant la longueur d'onde). Ces affichages

correspondent toujours aux valeurs mesurées directement, c'est-à-dire sans correction, pour être ensuite

prises en compte dans l'évaluation, comme par ex. les corrections des trajets optiques de la cuve ou les

corrections d'arrière-plan.

12.1.1 Blanc

Les valeurs de l'absorbance se rapportent toujours à la dernière valeur à blanc mesurée. C'est pourquoi, la

valeur à blanc sera mesurée obligatoirement au début de chaque série et à un moment quelconque de la

série de mesures. Dans le cas idéal, la mesure à blanc devrait pouvoir compenser tous les effets

susceptibles d'influencer l'absorbance d'une solution de mesure. C'est pourquoi, la valeur à blanc devrait

être mesurée avec le tampon utilisé pour mesurer l'échantillon et dans la même cuve que celle utilisée pour

déterminer la valeur de l'échantillon – sauf si les cuves utilisées pour la mesure de la valeur à blanc et de

l'échantillon ont fait l'objet d'une compensation optique, c'est-à-dire si elles ont la même absorbance à la

longueur d'onde de mesure.

12.1.2 Correction d'arrière-plan

Application principale : correction partielle des altérations de l'absorbance lors des mesures de l'acide

nucléique, causées par des turbidités dans la solution de mesure. Par exemple, l'absorbance mesurée à

320 nm, qui devrait être de l'ordre d'env. 0 A pour les acides nucléiques purs, sera soustraite de

l'absorbance mesurée à 260 nm, la longueur d'onde de mesure des acides nucléiques.

XXX, corrArPlan

= absorbance corrigée par calcul à la longueur d'onde XXX nm.

XXX

= absorbance mesurée à la longueur d'onde XXX nm.

ArPlan

= absorbance mesurée à la longueur d'onde d'arrière-plan.

Lors de la comparaison des résultats obtenus ici avec ceux d'autres photomètres/

spectrophotomètres, n'oubliez pas que les valeurs risquent de varier suivant la largeur de

bande des appareils. Ces écarts risquent d'être particulièrement élevés dans les cas suivants :

• Le spectre d'absorbance présente un pic étroit dans la longueur d'onde de mesure.

• La mesure n'est pas réalisée au maximum mais sur le flanc d'un pic.

C'est pourquoi, vérifiez que la méthode est correcte en mesurant des étalons.

BkgrXXXcorrBkgrXXX

AAA 

1 2 ... 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 ... 109 110

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